产品货号：
WH0063
中文名称：
快捷型总RNA提取试剂盒
英文名称：
Total RNA Extraction Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒是一种以异硫氰酸胍/酚为基础的RNA提取方法。独特配方的裂解液RZ能快速有效去除细胞中基因组DNA和蛋白质，使获得的RNA纯度高，稳定性好。
本试剂盒用于从血液、动物细胞、组织、植物组织中分离总RNA，每个离心柱每次可处理50-100mg组织或5×106细胞，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA得率更高，纯度更好，没有DNA和蛋白的污染，可用于多种下游实验。
产品特点：
· RNA纯度更高，无杂质残留，特别适合于对纯度要求高的下游实验。
·应用广泛，可提取多种不同实验样本。
·操作简单，可在一小时内完成实验。
下游应用：
· RT-PCR。
· Northern Blot、Dot Blot。
· Real-Time PCR。
· polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。
试剂盒组成：
储存条件：室温（15-25℃)保存，裂解液RZ应在2-8℃避光保存。
预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V)，放置过夜，高压灭菌。）
使用前注意事项：
若提取细菌RNA，推荐应用培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒（目录号：WH0060）
操作步骤：
第一次使用前应在去蛋白液RD、漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
1．样品处理
a．组织：将组织在液氮中磨碎。每50-100mg组织加1ml裂解液RZ，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液RZ体积的十分之一。
b．单层培养细胞：直接在培养板中加入裂解液RZ裂解细胞，每10cm2面积加1ml RZ。用取样器抽打若干次至溶液透明。
注意：裂解液RZ的加入量根据培养瓶面积决定，不是由细胞数决定。如果加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。
c．细胞悬液：离心取细胞，弃上清。每5-10×106动物细胞和植物细胞加入1ml裂解液RZ。加裂解液RZ前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
d．血液：直接取新鲜血液，加入3倍体积RZ（推荐0.25 ml血液＋0.75 ml RZ），充分振荡混匀。
2．将匀浆样品在15-30℃放置5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：4℃ 12000rpm （~13400×g)离心5 min，取上清，转入一个新的无RNase的离心管中。
注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，RNA存在于上清溶液中。
4．加入200μl氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 sec，室温放置3 min。
5．4℃ 12000rpm （~13400×g)离心10min，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，水相的体积约为所用裂解液RZ试剂的50%。把水相转移到新管中，进行下一步操作。
6．缓慢加入0.5倍体积无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心30 sec，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱CR3，请分两次转入吸附柱CR3中，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃掉收集管中的废液。
7．向吸附柱CR3中加入500 μl去蛋白液RD（使用前请先检查是否已加入乙醇），4℃12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃废液，将CR3放入收集管中。
8．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW（请先检查是否已加入乙醇），室温静置2 min，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃废液。
9．重复操作步骤8
10．将吸附柱放入2 ml收集管中，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心2 min，去除残余液体。
注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CR3在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT-PCR等实验操作。
11．将吸附柱CR3转入一个新的1.5 ml离心管中，加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2min，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防降解。
注意：如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。
相关搜索：快捷型总RNA提取试剂盒，Total RNA Extraction Kit
本试剂盒用于从血液、动物细胞、组织、植物组织中分离总RNA，每个离心柱每次可处理50-100mg组织或5×106细胞，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA得率更高，纯度更好，没有DNA和蛋白的污染，可用于多种下游实验。
产品特点：
· RNA纯度更高，无杂质残留，特别适合于对纯度要求高的下游实验。
·应用广泛，可提取多种不同实验样本。
·操作简单，可在一小时内完成实验。
下游应用：
· RT-PCR。
· Northern Blot、Dot Blot。
· Real-Time PCR。
· polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。
试剂盒组成：
| 组分 | 50T |
| 裂解液RZ | 60ml |
| 去蛋白液RD | 12ml |
| 漂洗液RW | 12ml |
| RNase-Free ddH2O | 15ml |
| RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管) | 50套 |
| RNase-Free离心管（1.5ml) | 50个 |
储存条件：室温（15-25℃)保存，裂解液RZ应在2-8℃避光保存。
预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V)，放置过夜，高压灭菌。）
使用前注意事项：
若提取细菌RNA，推荐应用培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒（目录号：WH0060）
操作步骤：
第一次使用前应在去蛋白液RD、漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
1．样品处理
a．组织：将组织在液氮中磨碎。每50-100mg组织加1ml裂解液RZ，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液RZ体积的十分之一。
b．单层培养细胞：直接在培养板中加入裂解液RZ裂解细胞，每10cm2面积加1ml RZ。用取样器抽打若干次至溶液透明。
注意：裂解液RZ的加入量根据培养瓶面积决定，不是由细胞数决定。如果加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。
c．细胞悬液：离心取细胞，弃上清。每5-10×106动物细胞和植物细胞加入1ml裂解液RZ。加裂解液RZ前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
d．血液：直接取新鲜血液，加入3倍体积RZ（推荐0.25 ml血液＋0.75 ml RZ），充分振荡混匀。
2．将匀浆样品在15-30℃放置5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：4℃ 12000rpm （~13400×g)离心5 min，取上清，转入一个新的无RNase的离心管中。
注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，RNA存在于上清溶液中。
4．加入200μl氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 sec，室温放置3 min。
5．4℃ 12000rpm （~13400×g)离心10min，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，水相的体积约为所用裂解液RZ试剂的50%。把水相转移到新管中，进行下一步操作。
6．缓慢加入0.5倍体积无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心30 sec，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱CR3，请分两次转入吸附柱CR3中，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃掉收集管中的废液。
7．向吸附柱CR3中加入500 μl去蛋白液RD（使用前请先检查是否已加入乙醇），4℃12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃废液，将CR3放入收集管中。
8．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW（请先检查是否已加入乙醇），室温静置2 min，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃废液。
9．重复操作步骤8
10．将吸附柱放入2 ml收集管中，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心2 min，去除残余液体。
注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CR3在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT-PCR等实验操作。
11．将吸附柱CR3转入一个新的1.5 ml离心管中，加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2min，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防降解。
注意：如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。
相关搜索：快捷型总RNA提取试剂盒，Total RNA Extraction Kit